Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日渐扩展

从第一次用到家兔自身抗形体到用到1型式肾病诊断病因的十分困难率在学童时期就有很好的描绘出，多个家兔自身抗形体HIV的学童当中有70%在血清转换后10年内中风肾病，而随访15年的学童这一数目上升到84%。相对于之下，占多数诊断1型式肾病一半以上的型式1型式肾病的患病功能还没有得到充分的学术研究。

更加多的人开始适用分期子系统来定义1型式肾病的十分困难：个形体在用到多种家兔自身抗形体时进入第1过渡阶段，用到血糖间歇性时进入第2过渡阶段，用到病因时进入第3过渡阶段。一些多发家兔自身抗形体HIV的个形体，在1期和2期，十分困难较太快，并发展为患病的1型式肾病。我们之前描绘出了举例来说在首次样品到多种家兔自身抗形体样品后至少10年无肾病的短时间十分困难者，这第一组病患者人数少，但特征相当明确。随后，我们发现家兔自身抗体特异性CD8+T巨噬细胞当中间体在十分困难较快的病患者当中基本不存在，但在近期患病和长期存在的肾病病患者当中很容易样品到。这可能会表明，与十分困难病患者相对于，这些病患者化脓性当中间体的调节增强。

早期学术研究表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但肾病病患者存在一些机能缺陷，其当中包括对IL-2的当中间体能力降低。此外，肾病病患者当中的现像CD4+T巨噬细胞可能会对调节更为具抵抗性，展现出为现像T巨噬细胞的抑止减弱，连续性消除的Treg和形肾脏消除的抑止Treg，以及抗体随之而来的CD4+T巨噬细胞当中IL-2当中间体减弱。本学术研究的目的是描绘出了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群极较快十分困难者当中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

步骤：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁以下确诊的病患者亲属当中安全检查1型式肾病的生命危险因素。我们之前描绘出了长期较快十分困难者的特征，他们保持多重家兔自身抗形体HIV超过10年，但没有用到肾病的诊断病因，太快性或非顺利进行性化脓性。随后，10名继续保持无肾病并想要提供大量血液样品的较快十分困难者纳入T和B巨噬细胞机能分析。在目前的学术研究当中，8名太快十分困难者(SP第一组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的家兔自身抗形体HIV。所有的参与者都受制于1型式肾病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗形体对某些抗体的HIV当中间体，然而，一名病患者已经受制于2期至少6年，但没有用到诊断病因，一名病患者被诊断为肾病，该受试者72岁，在通过观察科学实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在分析当中对该供形体顺利进行了分开风险评估。分立外周血单个核能巨噬细胞(PBMCs)，采用多实例流式巨噬细胞术和T巨噬细胞抑止试验风险评估供形体当中Treg的kHz、表型式和机能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)顺利进行无监督聚类分析，风险评估Treg表型式。

结果：与卫生供形体相对于，来自太快十分困难形体的梦境CD4+T巨噬细胞的监督聚类揭示，诱导的梦境CD4+ TregkHz上升，与糖皮质激素抑止的TNFR具体蛋白(GITR)表示上升有关。一名HbA1c升高的病患者与十分困难较快者和匹配的相符合第一组相对于，Treg谱有所不同。机能分析表明，与卫生供形体相对于，来自较快十分困难形体的Treg细胞内的CD4+现像T巨噬细胞抑止明显受损。展现出为对现像CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表示的抑止上升。

所示1 全面性的表型式分析揭示，CD4+Treg亚型式在太快十分困难数据流当中上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物表示解剖出10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)适用9个不同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个战斗群(100个战斗群)，更为大的元战斗群(10个元战斗群)在节点第一组周围上色。每个节点当中的糕所示透露单个标明的表示级别。(b)每个元聚类的热所示，以揭示整形体标明表示。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说总质量为每个metacluster筒相所示(总质量> 0.05%)具体为HD和SP第一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。深蓝色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 适用CITRUS的预测模型式证实，TregkHz的上升是十分困难较快的标志。分级除此以外(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示顺利进行分立，演示FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(星点)第一组以及供形体SP 606(深蓝色)当中CD25+ cd127的kHz汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外开集的筒相所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头值得注意的簇被识别为SP和HD数据流彼此之间的不同。(j)筒相所示揭示了在SP(星点)和HD(灰点)第一组当中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对来说总质量(数目)。(k)直方所示揭示每个簇的表型式(粉红色)和Treg标明相对来说表示与文化背景表示(蓝色);上列，CPUTreg_3;一个大一行，CPUTreg_4。文化背景与所有其他簇当中标明的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

所示3 与卫生献血者相对于，十分困难较快者梦境treg的GITR上升。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表示标明的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的表示热所示(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表示联结，揭示直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有供形体包括，p< 0.05(蓝色)供形体SP 606和匹配的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表示，从分级除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)联结，揭示直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

所示4 来自较快十分困难的CD4+ treg巨噬细胞操纵现像CD4+T巨噬细胞的能力降低。SP第一组用蓝色的中央线和带子透露，HD第一组用黑色的中央线和带子透露，深蓝色的中央线/带子透露供形体sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标明为CFSE, Treg按观察的数目校准。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养3过后顺利进行流式巨噬细胞术样品。(a-d)与CD4+此番者相对来说应的treg培养(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。适用HIV相符合(诱导的响应巨噬细胞不含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 现像CD4+T巨噬细胞对较快十分困难的T巨噬细胞重置的抑止更为恰当。SP第一组用蓝色的中央线和带子透露，HD第一组用黑色的中央线和带子透露，深蓝色的中央线/带子透露供形体sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标明，treg按观察的数目校准。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培养3过后顺利进行流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬生长因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止三份(b)。(c,d) CD25抑止三份(c)和CD134抑止三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养当中的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得出结论的论断是，来自较快十分困难子的重置梦境CD4+Treg在GITR表示当中得到了扩展和丰沛，强调了进一步学术研究Treg在1型式肾病风险个形体当中的一般而言的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28